Ваш дерматолог

   
врач - дерматолог

 

 

Цитохимические методы исследования

 

Большая медицинская энциклопедия
Авторы: А. Н. Наровлянский, А. М. Амченкова

 

Цитохимические методы исследования – микроскопические методы исследования, позволяющие проводить анализ химического состава клетки и локализации в ней исследуемых веществ при сохранении структуры клетки (см.: цитохимия). Цитохимические методы исследования широко используют в цитологии, эмбриологии, патологической анатомии, физиологии, фармакологии. Эти методы помогают определять характер, интенсивность обмена веществ в клетке, а также изучать различные специализированные функции клетки.

В отличие от гистохимических методов цитохимические методы исследования применяют для анализа только отдельных клеток или их групп, причем цитохимические методы обладают большей чувствительностью. От биохимических методов исследования цитохимические отличает возможность точно определить локализацию исследуемых веществ в клетке. Цитохимический анализ, выявляя специфичность тканевых клеток, дополняет биохимические исследования.

Появление цитохимических методов исследования связано с развитием цитологии, биохимии, физиологии, аналитической и органической химии.

Методы исследования химического состава клетки подразделяют на физические (интерференционная, флуоресцентная и УФ-микроскопия) и собственно химические. Последние должны обеспечивать специфичность связывания красителя исследуемым веществом, сохранение неизменной локализации вещества в клетке в процессе подготовки и проведения исследования, окраску конечного продукта химические реакции, сохранность структур клетки в условиях её осуществления. Белки, нуклеиновые кислоты, полисахариды и липиды в клеточных структурах выявляют с помощью красителей (хромогенные агенты), избирательно связывающихся со специфическими группами этих веществ. Для повышения специфичности реакций применяют экстрагирование, блокаду или ферментативное расщепление неспецифических компонентов. Сохранение неизменной локализации анализируемого вещества достигается его фиксацией. Для обеспечения сохранности структур клетки в условиях химических реакций используют методы (в том числе методы аналитической химии), не требующие применения концентрированных кислот, щелочей, нагревания до высокой температуры и т. п.

Оценка анализируемых с помощью цитохимических методов исследования веществ может быть качественной и количественной. При качественных методах цитохимического анализа интенсивность реакции и локализация её продукта определяются визуально, с помощью микроскопа. Качественные цитохимические реакции выявляют белки и аминокислоты клетки, различные ферменты, нуклеиновые кислоты, углеводы, липиды, пигменты, биогенные амины и неорганические вещества.

Для гистохимического и цитохимического выявления белков используют их физико-химические и биологические свойства или проводят реакции на содержащиеся в них специфические группы и аминокислот. К методам, использующим физико-химические и биологические свойства белков, относятся иммунохимические, авторадиографические методы, методы окрашивания, основанные на различии кислотно-щелочных свойств, методы, основанные на различиях в растворимости, методы ферментативного расщепления. К методам, использующим реакции на специфические группы белков, относятся методы определения белков по наличию реакционно-способных групп в аминокислотах.

В основе цитохимических методов исследования ферментов лежит выявление продукта ферментативной реакции. Выявление самого ферментативного белка возможно лишь с помощью сложных иммуногистохимических методов. Цитохимическими методами в настоящее время определяют около 90 из 900 известных ферментов.

Определение нуклеиновых кислот основано на выявлении входящих в их состав различных компонентов: пуриновых и пиримидиновых оснований (по поглощению УФ-излучения), фосфорной кислоты и др.; применяют и методы специфической ферментативной и химической экстракции.

Для выявления углеводов используют методы их окисления, метахроматического окрашивания, связывания ионов металла, блокирования или превращения реакционно-способных групп, ферментативный гидролиз; применяют также методы авторадиографии и иммуногистохимии. Среди методов выявления полисахаридов центральное место занимает ШИК-реакция.

Выявление липидов основано либо на восстановлении некоторых химических соединений жирными кислотами, либо на использовании свойства ряда красителей лучше растворяться в жировых веществах. Для выявления отдельных видов липидов часто используют комплексы различных методов.

Цитохимическое определение пигментов связано с выявлением присутствующих в их составе различных химических групп.

Биогенные амины (катехоламины и индоламины) выявляют цитохимическим методом, используя хромаффинную и аргентаффинную реакции, реакцию окрашивания и реакцию конденсации.

Определение внутриклеточной локализации неорганических веществ связано с большими трудностями из-за их низкой концентрации, хорошей растворимости и большой подвижности. Цитохимическое определение неорганических веществ основано на реакциях, продуктами которых являются лаки, хелаты, окрашенные соли, а также на реакциях замещения одного иона на другой. Применяют и методы микросжигания, рентгеновского микроанализа.

Количественные методы цитохимического исследования используют для определения содержания веществ в клетке и её структурах. Наиболее распространённым методом количественного цитохимического исследования является цитофотометрия. Важную роль играет также авторадиография, используемая для анализа скорости синтеза и обмена веществ в клетке, определения локализации отдельных веществ, перемещения их внутри клетки, для выявления клеток, маркированных радиоактивными изотопами и др.

Для выявления локализации определенных генов в хромосомах применяют метод гибридизации нуклеиновых кислот на цитологических препаратах. На предварительно денатурированную ДНК помещают радиоактивную РНК или же одноцепочечную ДНК, соответствующую структуре гена; места гибридизации обнаруживают авторадиографическим методом.

См. также: Гистологические методы исследования, Гистохимия, Иммуноморфология.

Большая медицинская энциклопедия 1979 г.

 

       
  Поиск по сайту 
«Ваш дерматолог»
 
       

 

 

Реклама, размещённая на сайте «Ваш дерматолог», является одним из источников его финансирования.
Наличие рекламы медицинских центров, лекарств, методов лечения, нельзя расценивать как рекомендацию владельца сайта к их посещению, приобретению или применению.

 

Последнее обновление страницы:18.11.2014           Обратная связь          Карта сайта

© NAU. При цитировании и копировании материалов убедительная просьба делать активную ссылку на сайт «Ваш дерматолог»

Представленная на сайте информация не должна использоваться для самостоятельной диагностики и лечения
и не может служить заменой очной консультации врача - дерматолога.